泥鳅的人工繁殖

(1)常用器具的 准备 产前必须备齐常用器具。器具品种 为直径6厘米左右的研钵2只,供研磨脑垂体和精巢之用;容 量为1~2毫升的医用注射器数支及4号注射针头数枚,用于 亲鳅注射催产剂;解剖用剪刀、刀、镊子各2把,用以摘取雄鱼 精巢;家禽翅膀上的硬质羽毛数支,作搅拌卵和精液的工具; 500或1 000毫升细口瓶1只,用于存放配制的林格氏液;10 或20毫升规格的吸管2支.用于吸取林格氏液;500毫升烧 杯或搪瓷碗数只,用于存放人工授精时的卵和精液I毛巾数 条,用于注射时包裹亲鳅;水盆或水桶数只,用于亲鳅催产前 暂养。

(2)催产剂的种类及其功能 目前常用的催产剂有3种: ①鱼类垂体促性腺激素(简称脑垂体):生理功能主要是 促进精子、卵子的发育,排精、排卵,控制性腺分泌激素,并能 引起副性征的出现。

②绒毛膜促性腺激素(简称HCG):生理功能主要是促使 排卵,同时具有促使性腺发育、促雌性或雄性激素产生的作 用。

③促黄体生成素释放激素类似物(简称LRH—A):生理功 能主要是刺激脑垂体合成和释放促性腺激素,促使性腺进一 步发育成熟,并能刺激排卵排精,还具备良好的催熟作用。 LRH—A系化学合成的白色粉末状激素,其特点是:高效、 注射量微、药源丰富、配制方便、成本低,不直接作用于性腺, 副作用甚微。且剩下的药液仍能继续留用,但应避光、干燥保 存,低温下保存更好,不易失去活性。这种化学合成的类激素 化合物不仅从根本上解决了脑垂体采集困难、来源紧缺的问 题,还能在繁殖季节里,对一些性腺发育尚差的亲鳅,使用低 剂量注射,能获得理想的催熟效果,雌鳅的卵核能较快地偏 位。雄鳅精液增多,其催熟作用远比脑垂体或绒毛膜激素为 佳。

(3)催产剂的采制、使用原则和配制方法

(!)脑垂体的采集:应挑选性腺成熟的鲤鱼、鲫鱼和青蛙作 为采集脑垂体的对象。因为性腺尚未成熟的鱼和蛙,其垂体有 效成分的含量甚少,待性成熟后,垂体有效成分含量相当丰 富•采集时间以冬至至清明为好,脑垂体的质量相对高些。应 采集活鱼或刚死的鲜鱼的脑垂体,不宜选用死亡已久的鱼。 脑垂体位于间脑腹面,与下丘脑相连(图4)。 脑垂体的采集方法 为:在鱼的头部两鼻孔 间、两眼上缘,用刀把颅 顶骨切开,除去脂肪,即 见到鱼脑部。再用镊子 将整个脑部翻出,则能 见到白色或浅黄色的垂 体。此时须用尖头镊予 轻轻地撕开垂体表面的 薄膜,将垂体取出。尽可 能使垂体取出时保持颗粒完整。不破碎。若颗粒稍有破碎,也 可采用。青蛙脑垂体的采集方法可基本参照上述方法。 取出的垂体若略带血水,可用镊子轻轻地将其置于手背 上,用镊子轻推垂体几下,使血水留在手背处,垂体保持基本 清洁。然后把垂体浸入相当于垂体体积10倍以上的纯丙酮中 进行脱水和脱脂。存放垂体的容器一般选用60毫升左右的棕 色细口玻璃瓶。当一次采集结束时,可先将集中放置垂体的棕 色细口瓶内的丙酮倒掉,再补充加入丙酮,其用量相当于原来 的容积,然后盖好瓶盖,将瓶子反复摇动数次,置于干燥阴凉 处。要每24小时换一次纯丙酮,经2~3次换液后,垂体中的 水和脂肪基本脱掉,则将垂体取出置于滤纸上晾干。垂体干燥 后,呈乳白色或略带淡粉红色的颗粒,再装入干燥的棕色细口 玻璃瓶中,密封瓶口 ,贴上标签,写明采集日期和鱼的品种。 脑垂体除上述的干燥保存法外,还可采用浸入法保存。即 在最后一次换液后注入新鲜丙酮后,将垂体与丙酮一并密封 于棕色细口玻璃瓶内贮存。

以上两种保存方法效果均很好,一般可保存两年,仍有 效。

此外,还可采用甘油(丙三醇)浸渍法保存。即把定量的干 燥脑垂体研磨成粉末状,浸入一定体积的甘油中,浸渍时间为 3个月以上。使用时取出定量的垂体甘油浸出液,按所需浓度 用水稀释后即可注射。

新鲜的脑垂体取出后无须保存也可直接使用。先将垂体 置于研钵内捣碎,并加少量的生理盐水,研成糊状,再注入定 量的生理盐水。待沉淀后取出清液,即可注射。 ②绒毛膜促性腺激素的制作方法:绒毛膜促性腺激素在 孕妇的尿液中含量较高,尤以怀孕后2~4个月的尿液为最 佳。以后含量逐渐减少。每天以清晨第一次尿液含量最高。 自制绒毛膜促性腺激素方法较为简单,容易操作掌握。只 要配备一些药液和添置少许常用设备便可制作。但每天需收 集到相当量的孕妇尿液,一般以居民集中的城镇设立收集制 作站为妥,最好是中等人口以上的城市,可确保孕妇尿液量。 妇女怀孕信息可通过医院、大型工矿企业医务部门(尤其 是女工较集中的纺织行业)中获得,然后登门拜访做工作,消 除思想顾虑,在取得孕妇本人和家属允诺后,留一存尿容器在 孕妇家中,告之方法和要领.则每天定时去取尿液。对乐意合 作的孕妇,给予适当报酬.更有利于工作的顺利进行。 绒毛膜促性腺激素的制作过程为: 收集到的孕妇尿经纱布过滤后集中于一搪瓷圆桶内,称 出其重量。然后加入10%工业盐酸溶液,使尿液的氢离子浓 度调整到10 000nmol/L(pH5)。再在每升尿液加loo毫升苯 甲酸酒精饱和液。尿液即呈乳白色,此时需搅拌30一45分钟。

搅拌后静置24小时。 经静置后的尿液上下分层。上层黄色清液去掉,留下层乳 白色沉淀液。在此液中加入95%工业酒精,按每升白色液加 80~90毫升酒精的比例。加酒精后的液体呈棕色。再静置24 小时。

静置后的液体,用真空抽气泵抽出粗激素,加入冰醋酸、 醋酸钠配制成的缓冲溶液。将液体的氢离子浓度调整在 15 850nmol/L(pI-{4.8)。用量为每升加15~20毫升。然后用 转速为每分钟3 000转的离心机分离。每次时间为30~40分 钟。离心后留下清液,集中置于500或1 000毫升量简内,用 95%酒精析出激素。激素与酒精的比例为1:8,又需静置24 小时。静置过的沉淀物用丙酮或乙醚干燥。当天气较暖、气温 在15 7C以上时,尿液需加由苯酚、酒精和水配制成的防腐剂。 常用溶液的配制比例和要求: 10%工业盐酸溶液:按盐酸与水比例为10:100。 苯甲酸酒精饱和液:苯甲酸与酒精的比例为300:1 000。 缓冲溶液:l/15摩尔/升(1/15克分子浓度)的醋酸钠+ 水+冰醋酸=9。07克+100毫升+3克。此液须隔天配好。 ③绒毛膜促性腺激素和脑垂体的生物检定:生物检定是 利用动物或活体组织来测定药物有效成分的一种方法。在规 定的条件下,测定生物或组织对药物的反应程度,以此比较待 测样品与其相应标准样品的效价。 绒毛膜促性腺激素和脑垂体的生物检定,常用方法有蟾 蜍排精法和蟾蜍离体跌卵法。 雄蟾蜍排精法为:取体重30~50克的雄蟾,皮下注射一 定量的绒毛膜促性腺激素或脑垂体,置20C恒温内3小时。 能引起排精所需的最低剂量,称最低有效剂量。 雌蟾蜍离体跌卵法为:取含卵100粒左右的卵巢块,置于 30毫升任氏液中,并加入不同量的绒毛膜促性腺激素或脑垂 体粉末,在16~18℃下,经24小时,跌卵50%以上的最低用 量,即为一个蟾蜍单位或称一个效价。 凡近期采集的脑垂体,可不必作生物检定,而直接使用。 ④使用催产剂的基本原则:对性腺成熟较差的亲鳅,尽可 能选用LRH—A及脑垂体作催产剂,并适当提高其剂量。因为 成熟度较差的亲鳅卵巢的过渡可能尚未完成,其卵巢对催产 剂的作用还欠敏感,因而适当增加剂量,可在短期内促使卵细 胞成熟,有利于产卵。一般可比常用剂量增加20~25%。 对腹部特别膨大的雌鳅和体重较大的亲鳅,一般应适当 减少注射量.尤其是使用绒毛膜促性腺激素和脑垂体时。 ⑤催产剂的配制方法:凡需配制的脑垂体,应先置于干燥 的研钵中研磨成细粉,再逐渐加入林格氏液,并搅拌均匀。如 将药液进行离心,取其清液,既可防止针头堵塞,又可减少异 性蛋白注入鱼体内。

若配制H CG或I。RH—A时,则可将其放入研钵中,逐渐 注入林格氏液,让其充分溶解即可。 催产剂应随配随用。在气温偏高的时节,如已配制好后暂 不使用,须置于冰箱内保存。 林格氏液的配方为: 、 在1 000毫升的蒸馏水中加入氯化钠7.5克、氯化钾o.2 克、氯化钙o.4克,并使其充分溶解。 (4)人工催产及授精 按选择亲鳅的标准,挑选体质健壮 的亲鳅,雌雄比例为1:2。凡属可催产的亲鳅,则注射催产 剂。注射剂量每尾雌鳅用鲤鱼垂体o.5~1个,也可用青蛙垂 体2个,或注射LRH—A5~8微克。注射绒毛膜促性腺激素, 按雌鳅每尾300~400国际单位或按每克体重用量为15~20 国际单位计,雄鳅减半使用。

泥鳅体表粘液多而滑,若注射操作不便时,可用毛巾或纱 布包裹住。如仍有困难,可试放入2ppm的丁卡因药液中麻醉 后再注射。

由于泥鳅个体较小,雌鳅每尾注射液量以o.2毫升为好, 雄鳅每尾注射液量减半,为o.1毫升。 催产剂的注射,一般采用体腔注射,也可采用肌肉注射。 体腔注射的部位是腹鳍或胸鳍的基部,也可在腹部前方的中 线部位注射。注射时将亲鳅体侧向上,略抬起鳍条,从鳍基无 鳞处由后向前入针,入针的角度以注射器与鱼体呈30。左右 的角度为宜,入针深度为0.2厘米左右。注射时尽量不要让鳍 盖住针头,以便察看药液的注入情况。如注射未成功,应换另 一鳍重新注射。肌肉注射一般可在侧线与背鳍之间,用针头挑 开鳞片后扎入肌肉,深度也为o.2厘米。为有效地控制入针深 度,可将针头磨到o.2厘米长,也可以在针头基部套上胶管或 塑料管,使针头露出o.2厘米。注射器和针头要煮沸消毒。 注射时间以下午或傍晚为妥,注射后的亲鳅放入网箱或 水缸内。效应时间与水温有关,当水温20℃时,效应时间为15 小时左右;水温在25℃时,效应时间10小时左右;水温达 27℃时,效应时间8小时左右。人工催产的亲鳅可以自行产卵 受精,亦可进行人工授精。若采取人工授精,则在临近效应时 间时,要认真观察水体中亲鳅的动静,若发现雌雄亲鳅追逐渐 频,表明发情已达到高潮,即可进行人工授精。此时轻挤雌亲 鳅的腹部,将成熟的卵挤入烧杯或搪瓷碗中,同时将精液也挤 到上述容器内。若亲鳅的精液很难挤出,可采取剖腹取出精巢 的方法。泥鳅精巢紧贴于脊椎两侧,剖开腹部后应用镊子轻轻 挑出两条乳白色精巢,再将其置入研钵中,用剪刀剪碎并进行 研磨。研磨好的精巢以每尾鱼加入50毫升林格氏液,配制成 精液,然后用移液管吸取配好的精液,注入存放卵子的容器 内,同时边用羽毛搅拌边轻轻摇晃容器,以增加精液与卵子的 接触机会,使卵受精。数秒钟后即可加入少量清水,把受精卵 漂洗数次,倾去血水,将受精卵撒在杨柳树根、棕榈皮等做成 的鱼巢上,使卵粘着于其上,最后移鱼巢至孵化环道或孵化缸 内进行孵化。

(5)鳅卵的人工孵化人 工授精工作,应相对集中在同 一时间内挤卵和授精,然后利 用家鱼人工繁殖用的孵化设施 进行人工孵化。 目前常用的孵化设施有孵 化缸和孵化环道两种。 ①孵化缸的结构和管理技 术:按材料来分,孵化缸可分为 镀锌铁皮、塑料、陶土等。 由镀锌铁皮制成的孵化缸 基本结构为:缸体、排水槽、支 架、进水管(图5)。 缸体由镀锌铁皮制成。大

小可根据需要设计制作。一般高为1米;缸上部直径为90厘 米•下部直径为75厘米,形成上大下小的近似圆柱体结构;在 与进水管相连处用铁皮制成倒圆锥形结构。 排水槽主要由镀锌铁皮、铅丝和筛绢组成。用镀锌铁皮制 成圆环形的水槽,8号镀锌铅丝为水槽上缘的加强筋;用筛绢 制成上口直径70厘米、下口直径90厘米、高10厘米的网罩, 与8号镀锌铅丝制成的网罩架用锡焊而成排水槽的内环。筛 绢由60目尼龙丝筛绢或50目铜丝筛绢制成。 支架由镀锌铁管或黑铁管与扁钢组成,尺寸与缸体相配。 进水管一端与缸体相连,另一端或直接与闸阀相接,或经 橡胶管再与闸阀相通。进水管管径为15毫米。 孵化缸的设计总高不宜超过1.4米。孵化缸太高,不仅不 便于操作,也可能因缸体太深,当水压不足时,由于水的冲力 不够而致鳅卵、鳅苗下沉,导致死亡。 塑料孵化缸除用材与铁皮孵化缸不同外,其结构、形式、 外形尺寸可参照应用。

陶土孵化缸即常见的由陶土烧制而成的陶缸,是以水缸 的陶器改制而成。一般选用的水缸形状、尺寸与铁皮孵化缸相 仿,但须在缸底开一孔,并将缸底用水泥改制成圆锥形。 孵化缸由缸底部进水,水流由下向上垂直移动,从顶部筛 绢溢出,经排水槽上的排水管排出。 水的流速由散落在水中的鳅卵的浮沉状况来决定。只要 能看到鳅卵在缸中心由下向上翻起,到接近水表层时逐渐向 四周散开后逐渐下沉,就表明流速适当。如鳅卵未及表层就下 沉,表示水的流速太小;反之,若水表层中心波浪踊跃,鳅卵急 速翻滚,表示流速太快。刚孵出的鳅苗对水的流速要求与鳅卵 相同,待鳅苗能水平游动时,流速可稍慢些。 鳅卵脱膜时,大量卵膜在相对集中的时间内漂起涌向筛 绢,造成水溢受堵,此时应用长柄毛刷在筛绢外缘轻轻刷动或 甩手轻推筛绢附近的水,以便使粘附在筛绢上的卵膜脱离筛 孔,使水流保持畅通。在脱膜阶段必须经常地清除筛绢上的卵 膜,以免筛孔全部受阻后,水由筛绢上口溢出,造成失卵现象。 由于孵化缸造价较低,制作方便,占地少,因此颇受群众 欢迎。

以热传导性能而言,铁皮传热最快,塑料次之,陶土最差。 若孵化缸置于室外,受阳光照射,铁皮孵化缸内的水温会略有 上升,而陶土孵化缸内的水温基本保持不变。铁皮长期盛水易 生锈,因此必须涂漆,每年孵化工作结束后须保养,重新涂上 油漆。在内壁一般涂白色,外壁涂灰色或深绿色均可。涂漆前 须用红丹漆作底漆,以免铁皮生锈。塑料孵化缸不须维修保 养,使用寿命较长,但因长期日晒雨淋,塑料老化加快。陶土孵 化缸经久耐用,但经不起重物敲击,易碎,必须防止敲打。 ②孵化环道的结构和管理技术:孵化环道的主体由水泥 构成,同时附设环形排水槽、纱窗、进水喷嘴、进排水管阀、出 苗池等(图6)。

孵化环道是鳅卵孵化的场地。一般可分为内外两圈孵化 环道。内、外圈环道分别安装进水管阀引入水源以控制流量。 在环道的底部设有形似鸭嘴的喷嘴。喷嘴的作用是增强水的 压力和喷水距离,以确保水体沿环道作圆周流动。环道内的水 经纱窗流入环形排水槽,由排水管阀流出。 出苗池是位于环道外壁的长方形水池。由管道与孵化环 道相连,管道口用闸板闸住。待出苗池轻启闸板时,孵苗连水 经管道流入设在出苗池中的集苗箱内。 砌造环道必须做到环道内外两壁与池底连接处呈弧形, 不可做成直角形,否则因水流造成死角而导致鳅卵下沉。 环道的外形尺寸可按生产规模来定。常见的环道外圈直 径为8米,内圈直径4.5米;环道宽均为1米,深o.9米。 在孵化过程中,环道的水流速度是一个至关重要的外界 因素。适宜的水流速度可确保卵、苗在水中浮动。在开始进卵 阶段,流速可稍 慢些,随着进卵 数量的增多逐渐 加大,待进卵结 束时调整流速到 最佳大小,并保 持基本稳定。 当鳅卵集中 脱膜时,大量空 卵膜随水流附着 于纱窗之上,同 时会造成尚未脱 膜的卵也容易粘 附在纱窗上,因 此必须用手经常 加速甩动纱窗附 近的水体,以期 卵膜等脱离纱 窗,并用长柄毛刷清洗纱窗上滞留的卵膜。 ③其他形式的孵化设施:除上述两种适宜于具有相当孵 化规模的单位使用的孵化设施外,养鳅专业户从生产实践中 总结出的另两种小水体孵化设施,也具有良好的实用价值。 孵化箱孵化。孵化箱用聚乙烯网片制成,箱面积一般为5 ~10平方米。箱体须高于水面30厘米,水深不大于50厘米。 置孵化箱于微流水水体内,保持水质清新。每升水可放卵500 粒左右。

小容器静水孵化。采取换水形式来确保水质清新,一般每 天换水2~3次。水深20~30厘米,每升水也可放卵500粒. 孵化期间,须用碱性绿或孔雀石绿多次消毒.消毒浓度为 孵化率的高低与水温有密切关系。以同一批卵进行对比 试验的结果是:水温15℃时为80%;20℃时为94%125℃时 为98%。鳅卵孵化时间长短与水温也有关。 刚孵出的泥鳅苗体长仅3.7毫米左右,全身肌节40节, 其中躯干部27节.尾部13节。背部有稀疏的黑色素,卵黄囊 前段上方有胸鳍的胚芽,卵黄囊前段和头部具有孵化腺,吻端 具有粘着器官,鳅苗借此使身体悬挂在鱼巢上。血管系统已形 成,卵黄前端有粗大的居维氏管。孵出后8小时30分左右,鳅 苗长至4.1毫米时,全身有较粗的黑色素,口裂出现,但上下 颚不能活动,口角上发生第一对触须的芽孢,鳃盖形成,鳃丝 伸出鳃盖外面,形成外鳃。居维氏管缩小,胸鳍扩大:孵出后 约33小时,鳅苗全长达4.6毫米时,口下位,开始活动,口角 出现第二对须,胸鳍基部垂直,能够来回扇动。孵出后58小 时,鳅苗全长达5.3毫米时,第三对须出现,鳔也出现,粘着器 官消失,鳅苗已能游动。此时应及时转移到育苗池中培育。若 暂不移入育苗池,须及时投喂蛋黄。可先将鸡蛋煮熟,除去蛋 白,把蛋黄研碎用开水调和成黄色混合液,洒在孵化设施内。 每10万尾鳅苗每天投喂1个蛋黄。

泥鳅的人工繁殖

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